Méthodes d'observation de routine et précautions de culture cellulaire
Méthodes d'observation de routine et précautions de culture cellulaire
Une fois les cellules inoculées ou sous-cultivées, l'expérimentateur doit procéder à un examen de routine des cellules tous les jours ou au plus 1 à 2 jours. Observez la morphologie et la croissance des cellules, ainsi que le changement de pH de la culture, s'il y a pollution, etc. Selon les changements dynamiques des cellules, effectuez un remplacement liquidien ou un traitement de passage. Si des conditions anormales sont trouvées, prendre des mesures à temps.
1. Les cellules avec un bon état de croissance morphologique peuvent être vues au microscope général, avec une grande transparence, une forte réfraction et un contour flou. Lorsque les cellules se développent mal, le contour est amélioré, des vacuoles, des gouttelettes lipidiques et d'autres particules apparaissent souvent dans le cytoplasme, l'écart entre les cellules est élargi et la morphologie cellulaire est irrégulière ou même perd ses caractéristiques d'origine, telles que les cellules épithéliales deviennent épithéliales comme cellules. Lorsque les cellules meurent, certains colorants peuvent se combiner avec l'ADN nucléaire désintégré à travers la membrane cellulaire dénaturée et les colorer. Par conséquent, le bleu trypan est souvent utilisé pour identifier les cellules mortes et vivantes. Les cellules vivantes ne se colorent pas et les noyaux morts sont bleus.
2. Croissance cellulaire après culture primaire ou inoculation d'une suspension cellulaire sous-cultivée, elle a commencé à proliférer après différentes périodes d'incubation. Les lignées cellulaires de passage, les tissus embryonnaires ou les tissus larvaires voient généralement la croissance cellulaire le lendemain et peuvent être connectés en morceaux en une semaine. Une fois que les cellules inoculées se sont développées sur toute la paroi de la bouteille, elles doivent être remises en culture à temps. Sinon, en raison de la consommation de nutriments et de l'accumulation métabolique, les cellules entreront dans la période d'arrêt ou de dégradation. À ce moment, le contour cellulaire est amélioré et des dépôts granuleux apparaissent souvent dans les cellules, qui sont des mitochondries gonflées. Le cytoplasme est vacuolisé et les cellules deviennent rondes et rugueuses. Dans les cas graves, les cellules tombent de la paroi de la bouteille. Ce n'est qu'en repiquant dans le temps que les cellules peuvent continuer à croître et à se reproduire.
3. Dans des conditions normales, la solution nutritive est rouge pêche. Si les cellules sont maintenues à pH 6,5 ~ 6,6, les cellules tomberont et mourront. Lorsque le milieu de culture est acidifié et devient jaune, cela indique que les métabolites dans le milieu de culture se sont accumulés jusqu'à une certaine quantité et que le milieu de culture frais doit être remplacé. Si HEPES est ajouté au milieu de culture ou cultivé dans un incubateur à 5% de CO2, le pH peut être maintenu relativement stable. Le temps de changement de solution nutritive dépend de la consommation de nutriments. Lorsque la cellule se développe vigoureusement, elle peut être changée tous les 2 à 3 jours, et lorsque la croissance est lente, elle peut également être changée tous les 3 à 4 jours. Une attention particulière doit être accordée au fait que les différentes cellules ont des exigences différentes en matière de valeur de pH.
4. Contamination microbienne après contamination microbienne de la culture cellulaire en culture, la valeur du pH changera et le milieu de culture apparaîtra trouble. Après une infection bactérienne, due au mouvement des bactéries, il y a un léger flash sous le microscope optique ; Dans les infections fongiques, de nombreux hyphes filamenteux et parfois des spores groupées ont été observés au microscope; La contamination par les mycoplasmes ne peut être détectée qu'à l'aide de certaines méthodes de détection. Après contamination cellulaire, il doit généralement être jeté. Pour les lignées cellulaires importantes, vous pouvez vous référer aux monographies pertinentes pour introduire certaines mesures de dépollution. Les expériences importantes et les cellules précieuses doivent être cultivées et exploitées par au moins deux expérimentateurs indépendamment, ou par une personne en plusieurs fois (à des moments différents). Outre les conditions sanitaires du laboratoire de culture, l'humidité de l'air est étroitement liée à la pollution microbienne. Des expériences importantes et à long terme doivent être effectuées en automne et en hiver lorsque l'humidité de l'air est faible.
Autres précautions :
Tout d'abord, observez fréquemment pour déterminer l'état de la cellule.
Deuxièmement, s'il faut ajouter des antibiotiques. Cela dépend de la situation. Dans le processus de culture cellulaire, il est nécessaire d'ajouter le moins d'impuretés non pertinentes possible. Les antibiotiques sont également un fardeau pour les cellules.
Troisièmement, la décongélation du sérum bovin fœtal. Le sérum est généralement conservé à - 20°C et décongelé au réfrigérateur à 4°C, ce qui prend beaucoup de temps et nécessite d'être décongelé un jour à l'avance.