Facteurs environnementaux de la culture cellulaire
Facteurs environnementaux de la culture cellulaire
1. Environnement stérile
La non-toxicité et la stérilité sont les principales conditions de la culture cellulaire in vitro. In vivo, le système de détoxification et le système immunitaire des cellules peuvent résister à l'invasion de micro-organismes ou d'autres substances nocives. Cependant, dans le processus de culture in vitro, les cellules manquent de la protection du système immunitaire du corps et perdent la capacité de défendre les micro-organismes et de détoxifier les substances nocives. Afin de s'assurer que les cellules peuvent croître et se reproduire in vitro, il est nécessaire d'assurer des zones de travail stériles, une bonne hygiène personnelle, des réactifs et des milieux de culture stériles et des opérations stériles.
La pollution microbienne courante comprend les mycoplasmes, les bactéries et les champignons. Les mycoplasmes n'ont pas de toxicité létale, peuvent coexister longtemps avec les cellules et ont des effets potentiels sur les cellules. Cependant, il est petit et difficile à identifier. Il peut être détecté par une coloration au rouge lichen ou au hoechst33342. Les bactéries prolifèrent rapidement et peuvent se développer en grande quantité en peu de temps et produire des toxines pour tuer les cellules. Il existe de nombreux types de champignons, qui peuvent être vus à l'œil nu. Ils flottent à la surface du liquide de culture et peuvent être filamenteux, tubulaires ou dendritiques.
2. La bonne température
Généralement, la température appropriée pour les cellules de mammifères et aviaires à cultiver in vitro est de 37 à 38 ℃, et la température environnementale inappropriée affectera la croissance des cellules. La tolérance de la cellule aux basses températures est plus forte que celle aux hautes températures. À basse température, l'activité métabolique de la cellule et sa capacité de division nucléaire diminuent. Si la température n'est pas inférieure à 0 ℃, le métabolisme cellulaire est affecté, mais il n'y a aucun dommage; À 25 ~ 35 ℃, les cellules se sont développées lentement ; Cependant, s'il est placé à 40°C pendant plusieurs heures, il n'est pas propice à la survie et à la croissance des cellules, et peut même entraîner leur mort.
3. Pression osmotique appropriée
Une solution hypertonique ou une solution hypotonique peut provoquer le plissement, le gonflement et la rupture des cellules. Par conséquent, la pression osmotique est l'une des conditions importantes pour la culture cellulaire in vitro. La plupart des cellules cultivées in vitro présentent une certaine tolérance à la pression osmotique. En application pratique, la pression osmotique de 260-320 mmol/l peut être appliquée à la plupart des cellules.
4. Environnement gazeux et pH
La culture in vitro de cellules nécessite un environnement gazeux idéal, et l'oxygène et le dioxyde de carbone sont les conditions nécessaires à la survie des cellules. L'oxygène participe au cycle de l'acide tricarboxylique des cellules et fournit de l'énergie pour la survie, le métabolisme et la synthèse des cellules ; Le dioxyde de carbone n'est pas seulement un produit métabolique des cellules, mais également un composant essentiel de la croissance cellulaire, et il est également lié au maintien du pH du milieu de culture. La plage de pH appropriée pour la plupart des cellules est généralement de 7,2 à 7,4. Dans la culture ouverte, 5% de dioxyde de carbone était le meilleur.